先用COIP证明蛋白之间在体内互作，拉下了蛋白的复合物；采用PULL DOWN技术去证明直接互作，同时还可以通过Co-IP抗体的选择在进行Co-IP实验前，需要确认抗体可以用于Co-IP实验。在Co-IP实验中，抗体需要识别蛋白的构象表位，只能识别线性表位的抗体可能无法将靶蛋白沉
抗体浓度太低，处理方法：调整IP和/或IB抗体浓度，必要时设立浓度梯度，摸索最佳浓度；抗体亲合力太低，处理方法：选用适合于IP和/或IB的相应抗体；IP抗体未与agarose珠子结合，处理方法：选用适合于IP的抗体的重链和轻链对于实验结果的干扰建议一：在CoIP捕获阶段和后续WB检测阶段尽量使用不同物种来源的抗体。建议二：利用交联剂将抗体交联到Protein A Sepharose或Protein G Sepharose上，使其不被
(2)取10uL全蛋白，作为input以备Western blot分析，剩余样本加入1μg相应的抗体，4℃摇床孵育过夜；(3)取10μL protein A 琼脂糖珠，用适量裂解缓冲液洗3 次，每次3,000 rpm离心3min; (4)将预处理过的1IP:IP即免疫沉淀(Immunoprecipitation),是指利用抗体可与抗原特异性结合的特性，将抗原(常为靶蛋白)从混合体系沉淀下来。Co-IP:Co-IP即免疫共沉淀(Coimmunoprecipitation),是一种在
· 选择适用于IP的抗体，用量参见抗体说明书。· 根据IP抗体的IgG亚型选择合适的珠子，如珠子储液中含有叠氮钠，则建议使用前先清洗珠子。· 对于部分有偶联步骤的试剂盒，需注意抗体多克隆抗体单克隆抗体单克隆抗体群(由一个免疫原产生的多个单克隆抗体混合物) 抗体抗原信号强度极佳由抗体的亲和力决定(极佳或者极弱) 极佳特异性通常很好，但有时会有
实验步骤基本就是：样品制备——Pre-clearing——结合(蛋白-抗体-珠子)——洗脱。科研蛙就从不同的文献中找了几个Co-IP的结果图，用实际案例让大家了解Co-IP实验的详细结果，以后再也免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation,Co-IP),是以(抗体和抗原)之间的专一性作用为基础的用于研究(蛋白质相互作用)的经典方法。是确定两种蛋白质在完整(细胞内生理性)相互作用的有效
