蛋白A和蛋白G对于不同种属和不同亚型的抗体结合能力差异如下表所示,蛋白A对兔来源抗体的亲和力较高,蛋白G对于小鼠等部分哺乳动物抗体的亲和力较高。关于CoIP 另外,还有一点值得注意的是,用于IP的抗体和用于WB的抗体最好是不同种属的,这样可以有效地避免WB检测时重链和轻链的干扰。悄悄地告诉你,使用以下二抗可以很好地避免干扰哦!3.3选择
目前多用protein A 或G 预先固化在琼脂糖或者磁珠beads 上,protein A 或G 可以结合各种抗体,具有通用性,当然它们结合不同种属来源的抗体的亲和力有差异,比(2)、不能用高浓度的变性剂(0.2%SDS),细胞裂解液中要加各种酶抑制剂,2、免疫沉淀中抗体的选择3、抗体使用对照抗体:阴性和阳性) 阴性:单克隆抗体:同一种属的IgG 兔多克隆抗体:正
在Co-IP实验中,抗体需要识别蛋白的构象表位,只能识别线性表位的抗体可能无法将靶蛋白沉淀出来,因此并不是所有的抗体都可以用于Co-IP实验。另外,用于IP靶蛋白抗原的分子量大约是50kDa或25kDa,Western Blot实验选择使用与免疫共沉淀抗体不同种属的抗体。3. 获得蛋白量低:1) 蛋白降解,加入蛋白酶抑制剂。2) 所用beads
Co-ip实验两个抗体需要不同种源吗答:最好选择两个不同种源的抗体。选择同一种源的抗体的问题在于:在WB之前进行的蛋白变性这一步,由于加样缓冲液中含有巯基乙醇,巯基乙醇会把然而,目前存在着COIP抗体种属问题,即不同的COIP抗体来源、生产工艺和性能特征可能存在差异,导致其在实际应用中的效果不尽相同。首先,COIP抗体来源的差异可能影响其种属问题。目前,C