蛋白丰度了于心，重链轻链已变性。Protocol与datasheet,研读操作需仔细。·流程STEP 1:样本制备考虑因素：做IP还是Co-IP?抗体对抗原表位是否有特殊要求？· IP:裂解、洗涤时，根据Co-IP实验中如何去除重链轻链的影响？1. 靶标蛋白与抗体重链(55kD)、轻链(25kD)分子量差别很大； 2. IP抗体：将IP抗体固定于磁珠上； 3. WB抗体：IP捕获抗体(如鼠源)与WB检测一抗(如
● 可以尝试反向拉，比如用Y去拉X,可能效果比较好3、我的蛋白正好和抗体重链分子量接近，要如何减少抗体干扰？● IP/WB一抗使用不同种属来源，选择与IP抗体种属有做过co-IP免疫共沉淀实验的很多同学都是会遇到重链干扰的问题，而针对这一问题给艾美捷出了解决的方案(IPKine系列新型的二抗产品),要知道产生此问题的重点在
WB部分：首先把IP沉淀下来的复合物蛋白给煮了，制备跑胶样品！在煮的过程中，IP抗体会断开成为重链+轻链。SDS-PAGE电泳时，重链，轻链，A蛋白一起出现！二、到底怎么形成的三条带？当IP抗免疫共沉淀(CoIP) 关注如何避免免疫共沉淀(CoIP)后WB的重轻链干扰如果遇到免疫共沉淀后期WB重链和轻链干扰的问题，可以选择上面的方法。pull down #免疫沉淀#免疫共沉淀#CoIP#GST
＞▂＜ CoIP 为何经常遇到假阳性？假阳性主要和抗体的浓度还有特异性有关，所以当抗体浓度高了，就降低浓度；抗体特异性差，就更换抗体。如何去除重链和轻链的影响阴性对照记得加，可以采ip后wb时本身就要煮沸变性，这对轻重链有什么影响呢赞回应昨夜风吹2022-07-26 01:08:40 美国直接煮beads轻重链全部打开，影响最重，不过目的蛋白不在25 55
3.将样品(15-30μl)上样到SDS-PAGE凝胶上。4.用蛋白质印迹法分析样品。如果抗体轻重链污染会影响结果分析，可选择Abmart的避重轻链二抗来解决这个问题，产品货第一，HC与LC条带都非常明显，之所以出现这个条件是因为，在WB之前进行的蛋白变性这一步，由于加样缓冲液中含有巯基乙醇，巯基乙醇会把抗体的重链和轻链之间的二硫键破坏，从而使的抗体变
