1.取适当的RIPA裂解液，在使用前2-3分钟内加入蛋白酶抑制剂。2.称量实验组织的重量，按照1:10(g/ml)的比例加入RIPA裂解液后将组织剪成细小碎片，用电动匀浆器匀RIPA裂解液裂解得到的蛋白样品可以用于常规的Western、IP等。RIPA裂解液的主要成分为主要成分为0mM Tris(pH 7.4),150mM NaCl,1% NP-40,0.5% sodium deoxycholate,0.1% SDS等，另加
一、细胞蛋白的提取1.收样前3min先配制细胞裂解液(现配现用),RIPA:蛋白酶抑制剂：磷酸酶抑制剂=99:1:1。6孔板收集蛋白每孔需200ul,计算用量。以收集六孔蛋白为例，按比例加入RIPA 11. 裂解液制备：每1ml冷的RIPA裂解液加入2ul蛋白酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。2. 取100mg组织样本用手术剪刀剪碎，加入1ml裂解液，用组织匀浆器匀浆至无明显肉眼可见固体。3. 将组织匀浆液在
RIPA裂解液裂解后得到的蛋白一般可直接用于常规的WB、IP、co-IP等实验。2.RIPA裂解液里有什么？RIPA裂解液的配制方法有很多种，主要包括裂解成分、蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂三种组分。裂解成分RIPA裂解液(强) 30 mL 100 mL 说明书1份使用方法自备蛋白酶抑制剂。RIPA裂解液(强)在临用前需加入蛋白酶抑制剂，推荐G2006,G2007,G2008等，防止蛋白降解。以下使用方法中提
组织中总蛋白的提取：(1)、将少量组织块置于1～2ml匀浆器中球状部位，用干净的剪刀将组织块尽量剪碎。2)、按照每20mg组织加入150-250μl裂解液的比例加入预加提取液可以不加蛋白酶抑制剂或磷酸酶抑制剂，注意提取过程保持低温操作，缩短离心时间。有效期1企检测方法WB、IP等适用样本细胞、组产品特点。便用方便，从细胞，组织中提取蛋白不需经过研磨
⊙＾⊙ 1. 取适当量的RIPA细胞裂解液，加入PMSF及其他的蛋白酶抑制剂。2. 对于贴壁细胞：去除培养液，用胰酶消化细胞或用细胞刮刀刮除细胞。用PBS清洗细胞1次。按照6 孔板每孔加入11.取适量裂解液，加入蛋白酶抑制剂cocktail及PMSF (终浓度1mM)。2.去除细胞培养液，用预冷的PBS 洗涤两次。按照6孔板每孔加入150-200ul的裂解液的比例均匀加入裂解液，如果细胞密度过高可增加裂解
