RNA免疫沉淀(RNA Binding Protein Immunoprecipitation,RIP)是研究体内蛋白与RNA的结合情况,基于抗体技术,通过针对目标蛋白的抗体将RNA结合蛋白(RBP)以及与其互作的RNA一起进行免RIP实验基本原理1、用抗体或表位标记物捕获细胞核内或细胞质中内源性的RNA 结合蛋白。2、防止非特异性的RNA 的结合。3、免疫沉淀把RNA 结合蛋白及其结合
一、实验原理RNA免疫共沉淀实验是利用特异性抗体将目标RNA分子与与之相互作用的蛋白质结合,然后通过免疫沉淀的方式将这些RNA-蛋白质复合物从细胞提取物中分离出来。通过这种该技术有多种变体,可分为两大类:天然和交联RNA 免疫沉淀(活细胞通过甲醛紫外线处理以固定RNA/蛋白质相互作用)。天然RIP 可以揭示直接与蛋白质结合的
打印本实验方案RIP 是一种基于抗体的技术,用于定位体内的RNA-蛋白质相互作用。将所关注的RNA结合蛋白(RBP)与其结合的RNA一起进行免疫沉淀,鉴定结合转录RNA(mRNA、非编码RNA1. 选择合适的抗体:抗体的选择是RNA免疫共沉淀实验的关键步骤,需要使用特异性的抗体来富集目标RNA。在选择抗体时,可以参考相关文献或进行预实验。2. 控制实验:为了验证RNA-
RIP可应用于研究miRNA调节靶点、RNA与RBP(RNA结合蛋白)的互作关系等。三、RIP技术的操作步骤1、样本制备-细胞/组织裂解2、免疫沉淀3、RNA提取及逆转录制备RIP 是研究细胞内RNA与蛋白结合情况的技术,是了解转录后调控网络动态过程的有力工具。RIP可以看成是普遍使用的染色质免疫沉淀ChIP技术的类似应用,但由于研究对象是RNA-蛋白复合物