7、离心，丢弃上清，加入5XSDS-PAGE loading buffer 50µl，95℃煮10min，后置于冰上。8、4℃ 12000rpm离心15min，取上清，可进行银染、WB等实验。20℃保存。1.3Western检测目的做IP不需要煮蛋白的原因。ip的抗体是我们找公司定制的，用于wb是没有问题的，是目的蛋白的肽段抗体。珠子是国产的，用量100微升。加30微升抗体孵育4度，4h+，再加
但在免疫共沉淀中，与靶抗原一起被沉淀的还有靶抗原的相互作用蛋白质，即随着抗体被吸附于固化了蛋白A或G的支持物上，相应的抗原及其相互作用蛋白质也同时被沉淀15. 将上样样品煮5min,以游离抗原，抗体，珠子，离心，将上清电泳，收集剩余琼脂糖珠，上清也可以暂时冻-20℃,留待以后电泳，电泳前应再次煮5min变性。RIPA Buffer配制：基础成分：
ゃōゃ 可以煮，不过就会产生重轻链。如果你的目的蛋白大小不在重轻链位置上，就可以。赞回应饕餮楼主2023-02-17 16:21:04 天津可以煮，不过就会产生重轻链。如果1.需要的设备4℃离心机，4℃旋转仪，超声仪。2.准备的试剂(1)预冷PBS IP缓冲液，分低、中、高盐三种配方：其他1mmol/L DTT,蛋白酶抑制剂(1 : 1000) 现加。3.实验设计免疫共
8.煮蛋白：瞬离，放磁力架上2min后弃液体，再瞬离使磁珠存于管底部，各管加1ХLB(用1Х电泳液稀释)25μl,涡旋，常温孵育10min,瞬离，磁力架上转移样品于新的1.5EP管或PCR管中，金属浴或PCR· b. 对蛋白进行变性，将IP抗体一同洗脱；· c. 如后续进行其他检测(如Kinase Assay),则需使用兼容下游检测的Elution buffer。2. 95-100°C煮样2-5min,14000 X g离心1min。3. 上
