1.首先是想问大家一般做CO-IP的总蛋白量是多少啊？我一般一组中是两个六孔板瞬转的量，大约500ug的蛋白。这样足够吗？2.关于抗体和抗体用量的问题。我想问，抗体4. 蛋白的分配：我一般会取50ul作为input,450ul作为igg,450ul作为IP组；其中input要加入蛋白loading,98℃煮样10min,-20℃保存；igg和ip要孵育相应抗体；5. pre-clear:igg和ip样品中加入
IP属地：贵州上传时间：2020-11-30格式：DOC页数：1大小：22.50KB积分：20版权申诉全文预览已结束下载本文档版权说明：本文档由用户提供并上传，收益归属内50ul beads对应的是一个reaction,而我们推荐一个reaction是100ul裂解上清(2×107 cells加入100ul RIP lysis buffer得到),所以只需要在裂解前计数一下，并按括号中的比例加入裂解buff
一、IP/ Co-IP重轻链干扰怎么来的？IP实验分成两个部分(免疫沉淀IP+WB)。免疫沉淀部分：在含A蛋白细胞裂解液中加入A蛋白抗体(IP抗体),再加入琼脂糖珠/磁珠，形IP实验步骤小心将上清移至另一试管中增加蛋白a的浓度彻底去处用于预处理的非特异性抗体三免疫复合物的沉淀1预处理的蛋白溶液置于适当数量的15ml的管中05ml管加入抗血清1ul作为起始用量滴定抗体量
下表为推荐的热门IP/CoIP抗体3. 固相支持物(琼脂糖珠or 磁珠) 由于IP技术是作为柱式亲和色谱层析的改进方法而开发的，其最初在微量离心管中使用少量(10–25 µL)琼脂糖树脂完成。琼脂糖是不同形细胞数过多/裂解物中蛋白含量过高导致洗脱液中含有大量非特异性蛋白减少细胞/裂解物用量，推荐使用10-500ug细胞裂解物非特异性蛋白结合抗体减少上样量。也可以在进行IP前将裂
甲醛处理细胞——收集细胞，超声破碎——加入目的蛋白的抗体，与靶蛋白-DNA复合物相互结合——加入ProteinA,结合抗体-靶蛋白-DNA复合物，沉淀——对沉淀下来的复合物进行清洗，除去一些(1)免疫沉淀(Immunoprecipitation,IP):利用抗原抗体特异性反应，对某个特定蛋白纯化富集的方法，主要过程包括捕获和固定。2)免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation,CoIP):CoIP是在IP实
