每次qRT-PCR反应使用了1/150体积的RIP RNA产物。每次RIP反应使用5抗体。如前所述(Xia et al.,2013)进行了ChIP实验。qRT-PCR定量ChIP富含的TCF7启动子，使用以下1.概述：RIP 技术(RNA Binding Protein Immunoprecipitation Assay,RNA 结合蛋白免疫沉淀)主要是运用针对目标蛋白的抗体把相应的RNA-蛋白复合物沉淀下来，经过分离纯化就可以对结合
1、标记实验所需的1.5ml EP管，样品包括目的样品，阴性对照与阳性对照。2、吸取50µl重悬后的磁珠悬液于每个1.5ml EP。3、每管加入500µl RIP Wash Buffer，涡旋震荡。4、将1.5ml EReal-time qPCR就是在PCR扩增过程中，通过荧光信号，对PCR进程进行实时检测。由于在PCR扩增的指数时期，模板的Ct值和该模板的起始拷贝数存在线性关系，所以成为定量的依据。由于
2.孵育完后，将EP管放磁力架上，将上清吸入一新的1.5ml EP管中，于每管中加入250µl RIP Wash Buffer。l RNA提取1. Input样品及sense、antisense、beads 样本分别加入1ml TRIZOL, 颠5. −80 °C冻存，样品也可以在−80 °C放置数月。二、磁珠-抗体复合物制备1.振荡混匀Protein A/G琼脂糖珠，根据样本数各吸取40ul到1.5mL离心管中；用0.5ml NT-
7.因为RIP做完得到的是RNA序列，要做后续检测，比如测序、判断目标序列位置等，是不是都必须要做RT-PCR,得到逆转录的DNA后，后面就跟ChIP相同了？常见的用Real tim6、用100 μl 的RIP Wash Buffer 重悬磁珠，加入约5 μg 相应抗体于每个样品中；7、室温孵育30 min; 8、将enpendoff 管置于磁力架上，弃上清；9、加入500
(1)取2 μL RNA样品检测RNA浓度。7.8结合RNA效率验证(PCR) (1)参考逆转录试剂盒说明书逆转录RNA样品。2)参考PCR试剂盒配置反应体系进行PCR,取10 µL PCR产物2%琼脂糖凝胶电泳。RIP-q-PCR (Protein-RNA)RIP前WB1个样本，1个抗体20 RIP富集2次：IgG、IP各1次RIP后WBIgG,IP,input各1次QPCRIgG,IP,input各1个泳道Ago2-RIP (miRNA-RNA) QPCR检测目的RNA 的本底表达
