电泳→转膜→封闭→洗膜→一抗孵育→洗膜→二抗孵育→洗膜→显影曝光5、Co-IP结果分析6、Co-IP拓展Co-IP注意事项：①温和的裂解条件②使用明确的抗体③使北京嘉美臻元生物技术有限公司生产的免疫共沉淀IP/COIP,一、免疫共沉淀实验技术原理免疫共沉淀(Co-IP)是利用抗原蛋白质和抗体的特异性结合以及细菌蛋白质的“
另外，还有一点值得注意的是，用于IP的抗体和用于WB的抗体最好是不同种属的，这样可以有效地避免WB检测时重链和轻链的干扰。悄悄地告诉你，使用以下二抗可以很好地避免干扰哦！3.3选择4. 转移膜上存在非特异性吸附：戴手套、用镊子，不触碰膜转移面。选择两个不同种源的抗体在实验中，IP的抗体用量较大，会导致抗体重链55kd的信号会很强。如果
免疫沉淀(ip)实验：CoIP、RIP、CHIP的区别IP实验原理IP又称免疫沉淀(Immunoprecipitation),是利用抗原和抗体的特异性结合以及“proteinA/G”特异性结合到抗体的FC片段的现象开发捕获抗体、检测抗体采用不同来源物种，使用针对检测抗体物种的特异性二抗；如果有可能，捕获抗体采用没有恒定区的纳米抗体。受限于财力和市场供应，上面两个解决方案都不是那么容易
2) IP-WB检测一抗直接标记HRP,WB实验过程中不使用二抗——这样就不会发生二抗识别CoIP产物中一抗抗体。产品推荐：M200系列HRP标记标签抗体); 3) 使用一款只识别天然构象抗体的二抗改进：换用IP/CoIP 专用的构象二抗(仅识别目的蛋白，不识别轻重链)如Vazyme #RA1008 和RA1009;在IP 和WB 时，使用不同种属的一抗(需要购买两种抗体);WB 用直标一抗(无二抗信号放
co-IP) 实验中，IP和WB的操作过程中通常会用到相同的一抗或同种属来源的一抗，这种情况下，如果使用常规的Anti-IgG(H+L)酶标二抗，WB实验中IP抗体变性后产生的重链这个步骤的目的是为去除样本中可与protein A/G琼脂糖珠非特异结合的蛋白质，减少干扰，非必做，如CoIP实验中发现有较多杂带，可考虑做一下；但应注意，选择此步骤后，需要消耗琼脂
