之后离心去除蛋白沉淀，通过基于质谱的TMT稳定同位素标记等蛋白质组学定量策略对溶液上清中的蛋白进行定量分先用COIP证明蛋白之间在体内互作，拉下了蛋白的复合物；采用PULL DOWN技术去证明直接互作，同时还可以通过巧妙设计诱饵蛋白结合域，判断出两蛋白互作的具体区域~ 当然啦，这个方法很不
蛋白往往不是独自行使功能，需要和其他蛋白结合形成复合体发挥作用。验证蛋白之间能有相互作用，也可以进一步对蛋白的功能进行研究。验证蛋白互作常用实验有：Y2H、BiFC、Pull-down● 洗涤不当造成杂带● 建议方案：pre clear或者更换磁珠；设置对照排除非特异性条带；优化缓冲液2、Input条带清晰，co-IP条带很弱？设X为诱饵蛋白，Y为靶蛋白，有可能为● X和Y的相互作用本身比较弱
o(?""?o 简介：免疫(共)沉淀(IP/CoIP)是基于抗体和蛋白的特异性亲和作用，通过捕获与蛋白或抗原特异性结合的抗体，进而从复杂的样品中捕获及富集目标蛋白，同时可以测定与5.杂蛋白太多加入抗体和proteinA/G-beads前100,000g 离心细胞30 min以去除膜成分或者不可溶蛋白6.目的蛋白没有溶解或者溶解不充分针对目的蛋白的特性选择合适的裂解液7.抗
6. 每1 ml 总蛋白中加入100 μl Protein A琼脂糖珠(50%),4℃摇晃10 min(EP管插冰上，置水平摇床上),以去除非特异性杂蛋白，降低背景。7. 4℃,14000g离心15min,注意：该CoIP操作步骤是将抗体先结合到Protein A/G-argarose微球上，然后再与抗原混合。相对其他方法，最终的得率较低，但避免了抗体共洗脱的问题。如果你希望获得
