三、实验注意事项抗体选择：用于COIP实验的抗体必须是IP级别的抗体，所以选购抗体时一定要看清楚该抗体能否用于IP实验。如下图为ABCAM中某个抗体的应用范围及Co-IP和GST pull-down实验操作区别Co-IP实验为体内实验条件，蛋白质的相互作用可以在天然状态下进行，其优点为可以避免人为影响，还可以分离得到天然状态下相互作用的蛋白复合体，缺
Pull-down：Pull-down试验是一种体外亲和纯化方法，使用诱饵蛋白来富集与诱饵蛋白互作的蛋白质。Pull-down试验的基本原理是使用与标签(如GST标签、His标签和生物素标签)融合的蛋白Co-IP和Pull-down 均可用于检测蛋白相互作用，两者有很多相似之处，包括均能检测两种蛋白质之间强相互作用，但均只能进行定性分析而不能检测瞬时相互作用，同时Co-IP和Pull-down在实
∪▂∪ 不难发现，GST pull-down和CoIP实验都是通过一种多组分的固相复合物将诱饵蛋白固定，随后富集靶标蛋白，从而确定靶标蛋白和诱饵蛋白互相作用的事实，整体思路是很类似的；不过由于固定实验室经验总结之：蛋白质相互作用几种方法比较(pull-down,IP,COIP,EMSA)!,酵母双杂交是最初步的筛选蛋白质相互作用的手段；当回转验证后呈阳性结果，需要GST-P
诱饵蛋白和捕获蛋白均可通过细胞裂解物、纯化的蛋白、表达系统以及体外转录翻译系统获得。在Pull-down实验中，设计恰当的对照实验非常重要，对照可以是表达有GST (非诱饵融合蛋白)的pulldown是把X,Y两种蛋白在体外分别表达纯化出来（比如在大肠杆菌中表达纯化），再混合到一起（有时也
