① 留取20ul左右细胞裂解的上清液加2 x loading buffer煮5min,作为input组② 提前将琼脂糖凝珠(S beads)均分至新的EP管内，要使用剪去了尖头的枪头吸取beads,Input：阳性对照，分别用A和B的抗体对input组进行WB检测如有需要请看以下：CoIP检测-南京瑞源生物
input就是最开始提的蛋白由Input组的条带可以得到结论：蛋白A与蛋白B都是存在的，证明样本处理提取蛋白的步骤没有任何问题。阴性对照IgG组和实验组平行进行免疫沉淀实验，结果蛋白A与蛋白B均没有条带，说明利用I
#蛋白免疫共沉淀#co-IP流程(设置Input组与IP组) 1.细胞(六孔板)从37℃柜取出，倒掉培养基，将六孔板与所需试剂置于冰上，向每个孔里加5ml预冷的1×PBS(巴氏管即可),所有操作都于冰上进再看图的第三部分，也就是下面的这一部分，是用FLAG抗体和HA抗体来进行检测整个细胞的裂解液，是作为阳性对照(有的文献中会标明input组),如下所示：image 其中右侧的WCL表示的是整个细
＞▂＜ Input组，即阳性对照组。为直接利用抗体FBX7(抗体YTHDF2)对细胞裂解液进行IB/WB检测，验证细胞裂解液中存在蛋白FBX7(蛋白YTHDF2)。IgG组，阴性对照。非特异性的特别是当1P 组中的抗体没有充分的特异性，而且样品中存在与目标蛋白相似的结构、序列或特性的蛋白质，可能会导致特异性误检测到一些不相关的蛋白质。INPUT 样品质量问题：INPUT 样品
假设Co-IP的实验组为“磁珠+抗X抗体+靶蛋白X+目的蛋白Y”，则可能出现的“假阳性”及需要设置的阴性对照组如下：另外，Co-IP实验还需要设置一个阳性对照组(Input组),即直接利用抗体X上述为了避免出现“假阳性”的对照称为阴性对照，除此之外Co-IP 实验还会设置一个阳性对照组(Input 组), Input 组为直接利用抗体X(抗体Y)对细胞裂解液进行WB 检测，验证细胞裂解液
