不建议通过裂解后测蛋白浓度的方法进行配比。6.RIP可以分提核浆的RNA-蛋白质复合物吗?理论上,可以采用能分别抽提核浆蛋白的蛋白抽提kit先分离样本,再进行RIP。7. 用等体积的RNA进行反转录及qpcr检测(如果10%input的RNA浓度过高,可稀释10至1%input 进行反转录)由于RNA提取与qPCR分析为常规使用操作,在此次就不再细讲,有需要的详细
╯△╰ 这类文章通常除了常规的m6A测序与转录组测序之外,还会结合一些其他的测序实验,如ChIP-seq、RIP-seq、RNA Pulldown,以及一些验证实验如双荧光素酶等,来完善酶对下游靶RNA,或上游基因1、经过免疫沉淀后的RNA浓度过低;2、Input组目的条带无扩增;3、RNA纯度未在1.8-2.1之间;4、阴性对照IgG反应中有目的条带。四、注意事项1、RIP反应体系中的试剂和抗体中
6.纯化免疫沉淀后RBP 上结合的RNA 7.将RNA 逆转录为cDNA,通过qPCR、微阵列或测序进行分析RIP 实验方案1. 细胞收集1.1.培养细胞至一定密度,按照实验要求进行处理。1二、可提供服务蛋白-蛋白,蛋白-DNA,蛋白-RNA互作相关的实验,公司主要提供给这些互作研究以及蛋白质组
总体来说,RIP检测实验需要在保持细胞生长状态的前提下进行一系列化学和操作步骤,并借助特定抗体和琼脂糖将RNA结合蛋白和RNA进行沉淀、分离和分析处理,以检测待一方面实验验证双萤光素酶实验验证其与miR-6077结合,另一方面lncRNA pull-down和WB实验表明lncRNA和Ago2参与miRNA介导的mRNA抑制,RIP实验同样证实了以上结果。这些结果表明GMDS-AS1
3、分光光度法测定RNA浓度,并对其纯度进行了评价,在免疫沉淀中使用优质抗体的情况下,可以从25x106个S2细胞中获得50-500 ng的RNA。4、合成cDNA,并用PCR-RT法测RIP(RNA结合蛋白免疫沉淀)实验1、实验简介RIP(RNA结合蛋白免疫沉淀)是研究体内RNA 与蛋白结合情况的技术,主要包括RIP-qPCR和RIP-seq两种;其中RIP-qPCR用来验证与目标蛋白结合的