⊙▽⊙ coIP: 抗体剂量上文提过了；其他flag、protein A等等beads一般用10ul足够了，偶尔根据需要微调，诸如过表达纯化蛋白。总之，一般CE的成本较低，若用CE饱和抗体、beads,只要你抗体2. 取蛋白样品分成input,igG组和目标抗体组进行IP。3. 取出预清洗的beads. 加入IP用的目标抗体和igG在rotator进行IP反应过夜。4. IP过夜后收取蛋白5. 通过SDS-PAGE和Western Bl
Co-IP(co-Immunoprecipitation),免疫共沉淀：co-IP 是一种常用的鉴定蛋白-蛋白相互作用的方法，其基本实验流程和IP类似，通过使用诱饵蛋白(IP 中的抗原，bait protein)特异性抗体间接捕答：ProteinA/G能特异性地结合到免疫球蛋白的FC片段，因此能和抗体结合，而抗体与目标蛋白结合，目标蛋白和相互作用的蛋白结合。Co-ip实验中使用的对照抗体有哪些？单克隆抗体：正常小鼠的IgG或另一类
选做：A.向细胞裂解液上清中加入1.0μg IgG(与IP及COIP实验一抗种属来源相同的普通IgG)和20μL A/G-珠子(使用前充分混匀),4℃摇转孵育30min;然后使用BCA法测定蛋阴性：单克隆抗体：同一种属的IgG 兔多克隆抗体：正常兔IgG 阳性：细胞内某种蛋白的抗体(做膜蛋白A,用膜蛋白B) 4.、未检测到目得蛋白或蛋白很少5、目得蛋白高背景abs955免疫(共)沉淀(
免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation,Co-IP),是以(抗体和抗原)之间的专一性作用为基础的用于研究(蛋白质相互作用)的经典方法。是确定两种蛋白质在完整(细胞内生理性)相互作用的有效改进：换用IP/CoIP 专用的构象二抗(仅识别目的蛋白，不识别轻重链)如Vazyme #RA1008 和RA1009;在IP 和WB 时，使用不同种属的一抗(需要购买两种抗体);WB 用直标一抗(无二抗信号放
(3)实验结果：Input检测图，IB检测图，考染胶，原始胶片及报告；注意事项：1、细胞量一定要达到要求；2、抗体必须是IP级别的抗体，做COIP,两支抗体必须是不同种属来源；3、关于实假设Co-IP的实验组为“磁珠+抗X抗体+靶蛋白X+目的蛋白Y”，则可能出现的“假阳性”及需要设置的阴性对照组如下：另外，Co-IP实验还需要设置一个阳性对照组(Input组),即直接利用抗体X
