3.实验步骤（1）总蛋白提取：样本中加入蛋白提取液200uL；上蛋白质能研磨仪，低温研磨2min；4℃,12000rpm，离心15min,收集上清，上清BCA蛋白定量法测定蛋白浓度为9.825mg/ml，约180pH2.8PierceSpinColumnsplusAccessories,27columnspre-insertedfritbottomcapsCollectionTubesCapsAccessoryPack,packs,100graduatedmltubesplugcapsperpackSt
1.IP-WB的实验过程经典的IP-WB实验通常包括以下主要步骤：首先以较温和的裂解液从细胞或组织中提取得到蛋白溶液，然后加入抗体和微珠进行孵育，再通过离心或磁经典的AP-MS实验通常包含以下4个关键步骤：1)细胞或组织的裂解；2)蛋白溶液与偶联抗体的亲和微珠的孵育；3)非特异性结合和背景蛋白的清洗以及特异性互作蛋白的洗
?△? 将两待研究蛋白(蛋白X与蛋白Y)分别与BD、AD结构域构建融合质粒。将构建好的两个质粒转入同一酵母细胞中表达，如果两蛋白之间不存在相互作用，则下游基因(报告基因)不会转录表达；如果病毒蛋白互作组学研究中的部分蛋白质组定量数据为例，提取其中病毒N蛋白相关的IP实验组和对照组数据，以相同的定量筛选标准筛选互作蛋白时(log2 Fold change>4,P<0.05),在使用4次重复
最后，利用生信分析在全基因组范围内获取与转录因子、组蛋白等互作的DNA区段信息。ChIP-seq实验流程CUT&Tag和DAP-seq技术是近几年发展起来的新技术。CUT&Tag通过蛋白特异性抗体引导简单来说，我们假定a蛋白和b蛋白可能存在互作，将纯化的融合GST的a蛋白和纯化的b蛋白以及能特异性结合GST的Sephrose 4B beads混合在一起孵育一定时间，然后洗去未结合的蛋白，煮沸beads
